昆虫-杆状病毒表达系统，属于真核细胞表达系统，有类似哺乳动物表达系统的翻译后修饰水平，也是最接近哺乳动物细胞表达系统的真核表达系统。该系统利用杆状病毒做为载体，导入外源基因，感染昆虫细胞表达蛋白，适合表达一些可能对哺乳动物宿主细胞产生负作用的蛋白，如GPCR、离子通道、激酶以及毒性蛋白等。

昆虫-杆病毒表达系统优点

1.具有糖基化作用、乙酰化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统；
2.正确的蛋白折叠、二硫键形成，使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白，有利于表达产物形成天然的高级结构；
3.具有对重组蛋白进行定位的功能，如将核蛋白转送到细胞核上，膜蛋白则定位在膜上，分泌蛋白则可分泌到细胞外等；
4.昆虫细胞悬浮生长，容易放大培养，有利于大规模表达重组蛋白。高表达量，最高表达量可达昆虫细胞蛋白总量的50%；
5.可表达非常大的外源性基因（~200kD）而不至于影响本身的增殖；
6.具有在同一个感染昆虫细胞内同时表达多个基因的能力；
7.通用性广，能用于表达来自病毒、细菌、真菌、植物和动物几乎所有的蛋白，并且能表达带有内含子的外源基因；
8.对脊椎动物是安全的。杆状病毒属于昆虫病毒，有高度特异的宿主范围，对脊椎动物和植物均无致病性，而且经重组后的病毒因失去多角体保护而使其在自然界的生存能力很弱，被认为是安全的载体。

昆虫-杆病毒表达系统分类

Bac-to-Bac表达系统

可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。首先，我们利用pFastBac载体与DH10Bac大肠杆菌感受态细胞中的亲本杆状病毒质粒重组，以形成表达杆状病毒质粒。然后，杆状病毒质粒转染到昆虫细胞中以生成重组杆状病毒颗粒。该系统使用p10和多角体蛋白启动子在各种昆虫细胞系（如Sf9、Sf21和HighFive细胞）中生成高表达水平的蛋白。

BaculoDirect表达系统

线性化的杆状病毒DNA两端含有attR位点，且两个attR位点间有HSV1tk基因，目的基因通过Gateway技术克隆到入门载体上，通过LR反应的重组DNA转染昆虫细胞，经更昔洛韦（ganciclovir）负选，得到含目的基因的重组病毒。

BaculoGOLD和BacPAK6表达系统

这两个系统都是利用Bsu36I将杆状病毒DNA酶切线性化，编码核衣壳基因的ORF1629部分缺失，不能在昆虫细胞中复制。但是，将线性化病毒DNA和转移载体共转染昆虫细胞后，通过同源重组，缺失的核衣壳基因的复制必需区域和外源基因可以一起重组到病毒DNA后，产生活性病毒。

FlashBAC系统

与BacPAK6和BaculoGOLD不同，AcNPVDNA复制必需基因（核衣壳编码基因的ORF1629）的缺失部分被一段人工合成的基因替代多角体编码区，改造后的环状杆状病毒不能在昆虫细胞中复制，当与转移载体共转染昆虫细胞后，通过同源重组重新获得复制必需基因片段并将目的基因转移到杆状病毒基因组中，只有发生同源重组的病毒才能在昆虫细胞中复制，从而实现在昆虫细胞中一步法生产重组杆状病毒，无需进行任何筛选。

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