案例分享二：制备跨膜转运蛋白/伴侣蛋白复合物，获得靶向该复合物的治疗性抗体，解析抗原-抗体复合物结构
要求：
1. 从跨膜转运蛋白基因合成到跨膜转运蛋白过表达和纯化
2. 以跨膜转运蛋白作为抗原免疫小鼠获得治疗性单克隆抗体
3. 获得抗体与膜蛋白抗原复合物的电镜结构
流程：
| 2周 | 4周 | 2周 | 1周 | 2-3月 | 时间随方法不同 | 8周 |
| 表达载体构建 | 昆虫杆病毒制备 | 抗原在HEK293细胞过度表达 | 抗原的纯化 | 免疫小鼠 | 抗体筛选 | 抗原-抗体复合物电镜结构解析 |
| 基于生物信息学的基因序列优化表达载体设计和合成 | 获得P0，P1和P2病毒 | 利用高亮度同步辐射X射线光源，对于晶体尺寸为1-100立方微米的单晶收集衍射数据 | 利用亲和层析和分子尺寸排阻层析提纯抗原蛋白 | 根据靶点选择合适的免疫策略：纯化的蛋白(去垢剂、脂质体、纳米盘)、过表达靶点蛋白的细胞 | 杂交瘤、噬菌体展示、单B细胞Beacon筛选时间不同 | 包括负染评估、冷冻制样、数据收集、2维分类、3维模型重构 |
制备跨膜转运蛋白/伴侣蛋白复合物并验证转运活性
制备抗体并验证抗体与靶标亲和力、在分子/细胞/小鼠上的抑制活性
利用单颗粒冷冻电镜解析SLC X/ancillary Protein与抗体复合物结构
